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内容简介
本书系统地介绍了DNA重组技术和方法．全书共分十一章简明地阐述了DNA重组技术的基本原理，详细地叙述了方法和步骤，并对操作中可能发生的问题和注意事项作了说明．本书作者根据实际经验，力求按国内条件选择实用易行的方法．最后附有分子生物学或遗传工程实验室常用的资料、通用技术、试剂配制和厂家索引等．可供生物化学、生物技术、遗传工程和分子生物学等方面的研究和教学使用．
目录
- 第一章 DNA重组常用酶 王贤舜
第一节 限制性内切酶
第二节 DNA重组常用的其他酶类
第二章 DNA重组常用载体 王培之
第一节 质粒
一、大肠杆菌质粒载体
二、枯草杆菌质粒载体
三、酵母细胞的基因克隆载体
四、质粒DNA的快速纯化和检测
第二节 λ噬菌体载体
第三节 cosmid载体
第四节 单链噬菌体载体
第五节 高等真核细胞的克隆载体
一、植物的克隆载体
二、动物细胞的克隆载体
第三章 凝胶电泳 王贤舜
第一节 琼脂糖凝胶电泳
第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳
第四章 DNA的分离纯化 刘震乾
第一节 细菌染色体DNA的纯化
第二节 质粒DNA的提取
一、质粒DNA的小量快速提取
二、质粒DNA的大量提取和纯化
第三节 λ噬菌体DNA的制备
一、λ噬菌体的增殖与纯化
二、λDNA的大量制备
三、λDNA的小量快速提取
第四节 从凝胶中回收和纯化DNA
第五章 DNA的切割和连接 刘震乾
第一节 DNA的切割
第二节 DNA片段的连接
第三节 DNA片段的末端修饰
第六章 核酸分子杂交技术 王申五 刘震乾
第一节 同位素标记探针的制备
一、缺口平移技术
二、核酸的125I化学标记
第二节 非同位素标记探针的制备
第三节 以SP6重组体制备RNA探针
第四节 Southern印迹法杂交技术
第五节 Northern印迹杂交
第六节 斑点杂交
一、DNA斑点杂交
二、RNA斑点杂交
第七节 菌落原位杂交鉴定重组质粒
第八节 噬菌斑原位杂交鉴定重组噬菌体
第七章 真核生物染色体基因库的构建 王玉珍
第一节 载体DNA的制备
第二节 插入DNA的制备
一、真核高分子量DNA的分离
二、高分子量DNA部分酶解及分离纯化
第三节 体外包装提取物的制备
第四节 DNA连接和体外包装
第五节 基因文库的扩增、分装及保存
第六节 从基因库中筛选目的基因
第八章 真核生物mRNA的纯化和cDNA文库的构建 徐洵
第一节 mRNA的纯化
一、细胞总RNA的制备
二、从组织中提取总RNA
三、多聚（A）﹢RNA的提纯
第二节 cDNA文库的构建
一、cDNA链的合成
二、cDNA的分子克隆
附：mRNA的体外翻译
一、兔网织红细胞裂解物体外翻译系统
二、麦胚抽提液无细胞体外翻译系统
第九章 DNA序列测定 刘震乾
第一节 双脱氧-M13系统DNA序列测定法
一、由M13克隆系统制备单链模板DNA
二、双脱氧链末端终止法序列测定
第二节 化学裂解法
一、DNA片段末端标记
二、标记末端的分离
三、化学裂解反应
四、聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影
第十章 重组DNA顺序在原核和真核细胞中的表达 周强
第一节 重组DNA顺序导入原核和真核细胞的方法
一、大肠杆菌的转化和噬菌体λDNA的导入
二、酵母细胞的转化
三、动物细胞的转化
四、接受外源基因的哺乳动物细胞的筛选
第二节 重组DNA表达产物的检测
一、大细胞技术（Maxicells）
二、紫外线照射细胞的噬菌体感染技术
三、免疫沉淀技术检测表达产物
第十一章 用体外诱变方法构建突变体 崔涛
第一节 缺失突变体
一、简单的缺失突变体构建
二、精细缺失突变体构建
第二节 插入突变
一、位点特异性插入
二、随机插入
第三节 寡聚核苷酸定点诱变
一、制备DNA模板
二、突变的寡聚核苷酸片段特异性测定
三、环状异源双链DNA的体外合成
四、富集环状异源双链DNA
第四节 盒式突变（cassette mutagenesis）
一、简并性寡聚核苷酸的设计和合成
二、通过互为引物的寡聚核苷酸合成双链DNA
三、寡聚核苷酸片段克隆
第五节 转化
第六节 筛选突变体
附录
一、常用实验技术
二、有潜在危险的材料与试剂的安全使用
三、常用名词缩写和简称
四、常用试剂和培养基的配制
五、常用实验材料及有关厂家和公司地址
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