本书作者是公认的RNA实验领域的专家，是著名的Exon-lntron生物技术培训中心的创立者。
本书汇集了有关RNA(核糖核酸)的分子生物学和细胞生物学的各种实验方法，包括分离提取、纯化、鉴定、生物活性的检验，以及通过对细胞内RNA状态的分析研究细胞基因的转录及其调控等。这一版新增加了大约30%的内容，涵盖了RNA研究的最新技术，比如RNAi，生物芯片和生物信息技术等；另外对许多常规实验技术也进行了更新，比如RT-PCR新技术和改良技术，5’和3’RACE、消减PCR技术、以及cDNA的合成等。
该实验手册主要收集整理了最新的真核RNA分离及鉴定的相关方法，而对原核转录实验的介绍涉及较少。书中的实验方法均是经过试验验证的最优化的方法。全书都是围绕RNA这一中心问题展开的，每一部分都附有大量清晰的图片、表格，并且还有习题，可以帮助读者更有效地学习，也更有利于读者安排自己的试验。
虽然本书是一本实验指导书，所讲述的都是具体的RNA研究的实验方法，但它的读者绝不仅限于实际从事RNA实验的工作人员。许多在平时工作中也接触到RNA的概念，但是没有条件或很少有机会自己新手进行RNA实验的人们，比如其他专业的科学工作者、工农业技术人员、中学生物学教师、临床医生、科普作家、科学出版物的编辑、大学低年级学生，只要有阅读英文专业文章的能力，也可以翻阅这本书。这样能够补充自己知识的不足，了解分子生物学家们是臬进行研究工作的，也能从中学到科学工作所必需的严格认真、实事求是的精神。
样章试读
目录
- 前言
第1章 重访RNA和细胞生物化学
为什么研究RNA?
RNA是什么？
多核苷酸的装配
RNA的种类
严谨度：影响核酸结构的条件
双链分子的种类
参考文献和推荐阅读材料
第2章 真核基因的转录和组织
转录和中心法则
基因组织
RNA聚合酶和转录产物
参考文献
第3章 信使RNA
典型的mRNA分子的拓扑学
在细胞质中的稳定性
调控水平
参考文献
第4章 难对付的核糖核酸酶
概述
核糖核酸酶活力的去除
核糖核酸酶抑制剂的种类
仪器和试剂的准备
用于控制核酸酶活力的其他试剂
方案：钒基核糖核苷酸络合物的合成
参考文献
第5章 分离RNA的策略
概述
纯化RNA过程中的目标
裂解缓冲液配方
用含胍的缓冲液分离RNA
胍-酸-酚抽提技术
密度梯度离心
同时分离RNA和DNA
关于试剂盒
其他方法
纯化的RNA的短期和长期保存方法
参考文献
第6章 关于组织的实验原理
概述
组织培养物还是组织？
匀浆法
各种器官和组织RNA分离的策略
方案：分离组织RNA的LiCl?尿素法
方案：从多脂组织分离RNA
聚核糖体中的mRNA的提纯
方案：聚核糖体mRNA的分离
在野外收集样品
RNA“清洗”法
参考文献
第7章 带polyA尾的RNA的分离
概述
加poly(A)尾
利用poly(A)时的注意事项
带poly(A)尾的分子的选出
Poly(A)+提纯用的磁珠技术
Oligo(dT)?纤维素柱层析
不用柱的快速Poly(A)+提纯
参考文献
第8章 RNA制品的质量控制
概述
质控技术1：RNA的电泳图
质控技术2：紫外分光光度法和光吸收比
质控技术3：样品支持RT-PCR的能力
质控技术4：Northern分析
质控技术5：样品支持体外翻译的能力
参考文献
第9章 点杂交分析
概述
优缺点
适当的正负对照
实验结果的局限性
参考文献
第10章 RNA电泳
概述
核酸的标准化
琼脂糖凝胶电泳的RNA变性系统
分子量标准
凝胶染色技术
电泳的安全考虑
电泳仪器的维护
第一次跑琼脂糖电泳：一些提示
参考文献
第11章 照相纪录和影像分析
概述
照相纪录
数字影像分析
推荐阅读
第12章 Northern分析
概述
滤膜的选择
处理和滤膜准备
Northern转移技术
滤膜转移后的处理
固定化技术
滤膜固定后的处理
参考文献
第13章 核酸探针技术
概述
探针的分类
选择标记系统
DNA探针
反义RNA探针
探针的纯化
探针的保存
内对照
参考文献
第14章 核酸杂交的实践
概述
影响杂交动力学和专一性的因素
杂交温度
杂交和Northern分析
参考文献
第15章 检测的原理
概述
放射自显影
非同位素方法
数字影像系统
参考文献
第16章 用抗核酸酶技术定量特定的mRNA
概述
基本方法的研究
探针的选择
关于最优化的建议
潜在的困难
方案1：用S1核酸酶检验定量测定转录物
方案2：用抗核糖核酸酶检验定量测定转录物
参考文献
第17章 核RNA的分析
概述
转录速率的检验
方案：核失控转录检验
方案：核失控转录检验：替代手续
方案：抗核酸酶和脉冲标记转录检验
RNA聚合酶I、II、III的活力的鉴别
抽提用于稳态分析的核RNA
方案：核RNA的直接抽提
方案：从富含核糖核酸酶的细胞制备核RNA
参考文献
第18章 cDNA合成
概述
cDNA合成概论
检查互补DNA合成的效率
连接时的考虑
参考文献
第19章 逆转录PCR
概述
PCR概论
逆转录PCR——普遍研究方法
实验室的设计
引物的设计
最优化步骤
PCR产物的分析
逆转录PCR质量控制要点
相关的技术4
方案：第1链DNA的合成
方案：cDNA的PCR扩增
克隆PCR产物
方案：平端PCR产物的末端加A4
方案：TA克隆的连接反应5
“TOPO”克隆法7
参考文献7
第20章 定量PCR技术
概述
灵敏度指数
定量研究
内对照
外对照
对照反应的设定方式
负对照的考虑
竞争PCR:关键的考虑
竞争PCR:主要步骤
方案：竞争PCR4
影像分析的考虑
竞争PCR常见问题分析
实时PCR
参考文献
第21章 转录物相减方法
概述
基本问题
相减-抑制PCR
非PCR相减
相减方法常见问题分析
参考文献
第22章 mRNA差异显示
概述
一般研究
产物的多变：预期什么
方案：mRNA差异显示
方案：差异表达的序列的鉴定和选择
用亲和捕获法回收差异表达的序列
克隆PCR产物
差异表达的证实
下一步的鉴定
差异显示的应用
mRNA差异显示中常见问题分析
参考文献
第23章 基因表达的高通量分析
概述
微阵列是什么？
微阵列能做什么？
微阵列不能做什么？
微阵列分析的主要步骤
参考RNA
应用
参考文献
第24章 RNA干扰：目的基因的沉默
概述
RNAi的基本名词
RNAi作用原理
siRNA的有效设计
体外和体内问题
参考文献
第25章 基因组、转录组、蛋白质组和生物信息学
概述
基本名词
基因组和基因组学
转录组和转录组学
蛋白质组和蛋白质组学
生物信息学
参考文献
第26章 RNA一例
典型的实验？
灵敏度问题
下一步做什么
到哪儿去求助
尾声几粒智慧之珠
附录A 保持完整而准确的记录
附录B 对分子生物学家有用的储存液
附录C 酚的制备
酚的饱和
方法1：用Tris饱和
方法2：用水饱和
参考文献
附录D 溴乙锭和SYBR绿溶液的弃去
方案1
辅助方案
方案2
方案3
参考文献
附录E 用DNase I从RNA样品中除去DNA
方案
附录F 用RNase保温从DNA样品中除去RNA
方案：从RNase中除去DNase活力
方案：RNA的酶解
参考文献
附录G 甲酰胺、甲醛和乙二醛的去离子
附录H 硅化离心管和玻璃器具
方案
附录I 离心:分子生物学家的主流工具
离心机的种类
转头
应用
差别离心
密度梯度离心——沉降速度
密度梯度离心——密度平衡技术
参考文献
附录J 贴壁细胞的胰酶处理方案
方案
附录K 盐析法分离高分子DNA
方案
参考文献
附录L 从植物组织提取RNA
附录M 电泳：原理、参数和安全
理论考虑
典型的电泳分离
介质的选择
琼脂糖的纯度
琼脂糖的浓度
聚丙烯酰胺的浓度
样品分子大小的范围
核酸的构象
外加电压
溴乙锭
SYBR绿
碱基组成和温度
电场方向
胶槽的样式
电泳的安全考虑
电泳仪器的维护
参考文献
附录N 聚丙烯酰胺凝胶电泳
分析用聚丙烯酰胺凝胶电泳
参考文献
附录O 仪器和试剂供应商及服务商选登
附录P 有用的国际单位制单位
附录Q 常用缩写
附录R 商标摘录
词汇表
索引
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