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内容简介
本书系统地介绍了核酸的杂交技术。全书共分六章。主要阐述核酸杂交的理论和背景知识，样品的制备，探针的放射性标记和非放射性标记，杂交方式和检测过程以及靶分子和探针的扩增等等。详述了与核酸杂交有关的实验方法、操作技术和注意事项。
这是一本系统而全面的手册，可供基因工程、分子生物学、遗传学、基础医学和临床工作者，以及高等院校有关专业师生参考。
目录
- 译者的话
前言
第一章 背景知识
分子杂交技术
探针-靶分子的相互作用
杂交技术新进展
一般原则
探针选择和特异性
杂交速率
探针浓度
严格性
杂交促进剂
应用范围
重组DNA实验室技术
细菌检测
病毒检测
哺乳类序列
参考文献
第二章 样品制备
引言
核酸的提取与沉淀
方法2.1 DNA的苯酚抽提
乙醇沉淀
方法2.2 DNA的乙醇沉淀
高分子量DNA的乙醇沉淀
方法2.3 缠统法分离高分子量DNA
乙醇沉淀的替代方法
DNA产率及纯度的测定
血液DNA的提取
方法2.4 肝素化全血中单核淋巴细胞的分离
血液白细胞核的快速分离
血清DNA的提取
方法2.5 人血清中HBV DNA的提取
组织DNA的提取
方法2.6 新鲜或冰冻组织DNA的提取
方法2.7 从石蜡包埋的组织中提取DNA
细菌DNA的提取
方法2.8 细菌细胞DNA的提取
RNA的提取
RNA操作注意事项
氧钒核糖核苷复合物-苯酚抽提法
方法2.9 氧钒核糖核苷复合物（RVC）的制备
方法2.10 细胞浆RNA的分离
利用异硫氰酸胍分离RNA
方法2.11 异硫氰酸胍分离RNA的方法Ⅰ
方法2.12 异硫氰酸胍分离RNA的方法Ⅱ
方法2.13 脲-氯化锂抽提RNA的方法
方法2.14 多聚（A﹢）RNA的纯化
其它来源样品核酸的提取
粪便
方法2.15 粪便标本的制备Ⅰ——DNA的提取
方法2.16 粪便标本的制备Ⅱ——直接斑点印迹法
尿液
方法2.17 尿样CMV的提取
其它样品
原位杂交所用细胞和组织的制备
封固细胞或组织之前载玻片的预处理
方法2.18 载玻片的酸洗
方法2.19 用APES预处理载玻片
方法2.20 用聚L-赖氨酸预处理载玻片
用于原位杂交细胞的制备
用于原位杂交细胞的固定
方法2.21 乙醇：乙酸固定
方法2.22 4％副甲醛固定
方法2.23 载玻片的福尔马林固定
用于原位杂交的组织制备
方法2.24 冷冻组织切片的制备
方法2.25 组织的福尔马林固定与石蜡包埋
染色体原位杂交
方法2.26 中期扩散相的制备
方法2.27 吉姆萨（Giemsa）分带
参考文献
第三章 放射性标记方法
引言
一般原则
通过酶学修饰标记DNA
DNA的缺口平移
方法3.1 通过缺口平移用放射性核苷酸标记DNA
DNA酶Ⅰ消解作用的优化
通过随机引物标记DNA
方法3.2 通过随机引物法用放射性核苷酸标记DNA
从M13模板合成探针
放射性标记的RNA探针
方法3.3 35S标记RNA探针的转录
寡核苷酸探针
由寡脱氧核苷酸模板产生RNA探针
方法3.4 从合成的单链寡核苷酸转录［35S］RNA探针
“接尾”寡核苷酸探针的制备
方法3.5 利用末端脱氧核苷酸转移酶进行寡核苷酸接尾
寡核苷酸5′端的标记
方法3.6 用T4多聚核苷酸激酶标记5′端
其它标记方法
方法3.7 用TCA沉淀法测定比活性
放射性标记探针的纯化
凝胶过滤法
方法3.8 利用Sephadex柱纯化标记探针
方法3.9 利用QuickSpin柱纯化DNA
标记探针的乙醇沉淀
方法3.10 用乙醇沉淀纯化标记探针
方法3.11 变性聚丙烯酰胺凝胶
疏水层析-Nensorb柱
方法3.12 用Nensorb柱纯化克隆的DNA
方法3.13 三苯甲基寡核苷酸探针的纯化
参考文献
第四章 非放射性标记方法
引言
酶学修饰
方法4.1 通过缺口平移法用修饰的核苷酸标记DNA
探针检查
方法4.2 靶分子检查条的制备
方法4.3 通过随机引物法用修饰核苷酸标记克隆的DNA
克隆DNA片段的接尾
方法4.4 用修饰核苷酸给克隆DNA片段接尾
方法4.5 8-氨己基-dATP（AH-dATP）的合成
生物素化的RNA探针
方法4.6 RNA转录体中生物素核苷酸的掺入
化学修饰
用生物素进行化学标记
方法4.7 DNA的光化生物素标记
用半抗原进行化学标记
方法4.8 DNA的光化DNP标记
方法4.9A 光化DNP的合成
方法4.9B DNP-二氨基己烷的合成
DNA的连接臂修饰
方法4.10 用亚硫酸氢盐和二氨基己烷修饰DNA
溴介导的DNA修饰
方法4.11 用溴和二氨基己烷修饰DNA
寡核苷酸探针
方法4.12 寡核苷酸探针的酶促接尾
方法4.13 氨基-寡核苷酸探针的合成和纯化
将检测基团加到氨基寡核苷酸上
方法4.14 寡核苷酸探针的生物素标记
酶联反应Ⅰ
方法4.15 利用均一的双功能连接臂酶标寡核苷酸探针
酶联反应Ⅱ
方法4.16 利用非均一双功能连接臂酶标寡核苷酸探针
参考文献
第五章 杂交方式和检测方法
引言
滤膜杂交
斑点印迹杂交
方法5.1 DNA的斑点印迹
方法5.2 RNA的斑点印迹
胞浆斑点杂交
方法5.3 胞浆斑点杂交
完整细胞的斑点印迹
方法5.4 利用斑点印迹快速筛选培养细胞的DNA序列
Southern印迹杂交
琼脂糖凝胶电泳
方法5.5 琼脂糖凝胶电泳
方法5.6 Southern印迹转移至硝酸纤维素膜
Southern转移至尼龙膜
方法5.7 DNA从琼脂糖转移至尼龙膜
RNA的Northern印迹
方法5.8 RNA的羟甲基汞凝胶电泳和转移条件
方法5.9 RNA的甲醛凝胶电泳和转移条件
菌落和噬斑筛选
方法5.10 从平板上复制克隆
方法5.11 裂解细胞并将DNA固定到滤膜上
滤膜杂交方法
方法5.12 滤膜与放射性标记探针的杂交
放射自显影
方法5.13 放射自显影
滤膜的再探测
方法5.14 从滤膜上洗脱放射性标记的探针
非放射性滤膜杂交条件
方法5.15 非放射性探针的一般滤膜杂交条件
半抗原检测
方法5.16 滤膜上半抗原标记探针的比色检测
生物素检测
方法5.17 滤膜上生物素标记探针的一步法比色检测
替代方法
方法5.18 滤膜上生物素标记探针的两步法比色检测
化学发光检测
方法5.19 滤膜的化学发光检测
过氧化物酶的检测
碱性磷酸酶的检测
方法5.20 尼龙膜上生物素标记探针的去除
原位杂交
方法5.21 用Denhardt溶液预处理载玻片
方法5.22 使用非放射性探针时福尔马林固定、石蜡包埋载玻片的预处理
方法5.23 使用35S标记探针的原位杂交
预杂交
杂交
杂交后处理
放射自显影
载玻片染色
方法5.24 杂交后载玻片的苏木精染色
方法5.25 使用半抗原或生物素标记探针的原位杂交
方法5.26 半抗原标记探针的显色
方法5.27 生物素标记探针的显色
检测溶解的靶分子的杂交方式
亲和捕捉
均质溶液杂交测定
夹心式（sandwich）杂交
方法5.29 微滴度孔中的夹心杂交
微滴度孔的准备
预杂交（8孔）
夹心杂交
孔条显色
其它方式
参考文献
第六章 探针和靶分子扩增系统
引言
靶核酸扩增
聚合酶链式反应
方法6.1 用于PCR的样品制备方法
方法6.2 从全血中快速制备PCR样品
方法6.3 利用PCR酶促扩增靶DNA
产物的杂交分析
基于转录的扩增系统
探针扩增
Qβ复制酶系统
探针网络
参考文献
附录A 试剂
缓冲液和试剂
配制方法
方法A.1 杂交缓冲液的大量制备
方法A.2 用于碱性磷酸酶的NBT和BCIP底物溶液
方法A.3 用于碱性磷酸酶的INT和BCIP底物溶液
方法A.4 用于碱性磷酸酶的坚牢红底物
方法A.5 乙酰化牛血清清蛋白（BSA）的制备
方法A.6 5#接尾缓冲液的配制
参考文献
DNA换算表
换算系数
DNA的编码能力
DNA和RNA的定量
米制前缀
核苷酸的消光系数
换算公式
缩略语表
附录B 其它方法
方法B.1 兔抗DNP抗体的制备
NHS-氨基己酸-DNP的合成
DNP-BSA的制备
家兔的免疫
血清的处理
方法B.2 碱性磷酸酶与抗体的结合
方法B.3 FITC-二氨基己烷的合成
方法B.4 FITC与BSA的偶联
参考文献
附录C 国外厂商地址及产品介绍
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