本书系统介绍了免疫细胞分离与鉴定技术,免疫细胞活化、死亡方式的检测技术,抗体制备技术及凝集反应,肠炎模型构建及相关检测,肝癌模型构建及相关检测等。同时,系统介绍了实验数据的统计学处理方法、图表呈现的规范性,汇总了实验过程中的常见问题与解决方案,并附免疫学实验中常用的试剂配方、免疫学实验常用设备及操作事项、动物实验伦理等,为基础免疫学实验的设计与实施提供技术指导。高校授课教师可申请教学课件。
样章试读
目录
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前言
第1章 免疫细胞分离与鉴定技术 1
1.0 血细胞的组成及造血基本过程 1
1.1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离、形态观察及吞噬功能检测 2
1.2 小鼠骨髓来源巨噬细胞的诱导 6
1.3 小鼠树突状细胞的诱导、形态观察及功能检测 11
1.3.1 小鼠树突状细胞的诱导、形态观察 13
1.3.2 树突状细胞抗原呈递功能的测定 14
1.4 小鼠脾及淋巴结单个核细胞的分离、染色及流式分析 16
1.5 自然杀伤细胞的分离、形态观察及功能检测 19
1.6 粒细胞的分离、形态观察及功能检测 23
1.7 人外周血单个核细胞的分离及体外诱导分化成巨噬细胞与功能检测 27
1.8 人外周血T细胞和B细胞的分离、形态观察及增殖反应 31
1.9 小鼠外周血T细胞的分离与增殖检测 34
第2章 免疫细胞活化的检测技术 38
2.0 免疫应答机制 38
2.1 免疫荧光检测LPS诱导巨噬细胞后 p65 的入核 39
2.2 ELISA检测巨噬细胞在LPS处理后细胞因子的分泌 43
2.3 Western blot检测LPS诱导巨噬细胞后 p65 的磷酸化 48
2.4 免疫共沉淀检测宿主抗病毒蛋白的互作 53
2.5 双萤光素酶报告基因技术检测细胞Ⅰ型干扰素通路的激活 57
2.6 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 IRF3 的二聚化 62
2.7 T 细胞活化中的钙流信号检测 66
2.8 T 细胞活化膜表面标志物的流式分析 70
2.9 B 细胞活化标志物的流式分析 74
2.10 B 细胞免疫球蛋白类别转换的诱导和检测 77
第3章 免疫细胞死亡方式的检测技术 81
3.0 免疫细胞死亡的基本类型和主要功能 81
3.1 细胞凋亡的诱导方法及检测技术 82
3.1.1 MTT法测定奥沙利铂诱导细胞凋亡的作用 83
3.1.2 荧光双染法鉴定细胞坏死 85
3.2 细胞焦亡的诱导方法及检测技术 86
3.3 细胞坏死性凋亡的诱导方法及检测技术 89
3.4 细胞铁死亡的诱导方法及检测技术 93
3.5 细胞自噬的诱导方法及检测技术 96
3.6 流式细胞术检测细胞凋亡 100
第4章 抗体制备技术及凝集反应 103
4.0 抗体的基本概念 103
4.1 抗人IgG多克隆抗体的制备 104
4.2 抗GST蛋白单克隆抗体的制备 108
4.3 凝集反应 114
4.4 沉淀反应 116
第5章 肠炎模型构建及相关检测 121
5.0 炎症性肠病概述 121
5.1 DSS 诱导小鼠急性结肠炎模型的构建 122
5.2 HE 染色检测小鼠肠上皮细胞的损伤 124
5.3 实时荧光定量 PCR 检测小鼠肠上皮细胞 IL-6 的表达变化 128
5.4 TUNEL技术检测小鼠肠上皮细胞的凋亡 132
5.5 5-氨基水杨酸(5-ASA)治疗小鼠肠炎的效果检测 136
第6章 肝癌模型构建及相关检测 140
6.0 肝癌的发生发展及治疗策略 140
6.1 小鼠肝癌移植瘤模型的构建 141
6.2 流式细胞术检测化疗药物对肿瘤免疫微环境的影响 144
6.3 组织化学染色检测化疗药物对肿瘤浸润免疫细胞的影响 149
6.4 免疫荧光染色检测化疗药物对肿瘤浸润免疫细胞的影响 153
附录Ⅰ 免疫学实验中常用的试剂配方 156
附录Ⅱ 免疫学实验常用设备及操作事项 162
附录Ⅲ 实验报告的书写规范 164
附录Ⅳ 动物实验伦理 165
附录Ⅴ 4R原则 167
附录Ⅵ 生物安全实验室的分级及适用范围 169
后记 171