本书概述了畜禽疫病诊断技术的发展历程和发展方向，系统阐述了酶联免疫吸附、免疫层析、免疫荧光、化学发光和蛋白质芯片等免疫学诊断技术，聚合酶链反应（PCR）/逆转录PCR（RT-PCR）、荧光定量PCR、等温扩增、数字PCR和基因芯片等分子诊断技术，以及表面等离子体共振和生物传感器等主要畜禽疫病诊断新技术的基本原理、检测方法和研究进展，并详细介绍了主要畜禽疫病诊断产品研发现状，以及其在畜禽养殖、兽医诊断、检验检疫、疫病监测、生物制品质控等领域的临床应用，可为畜禽疫病诊断试剂研发和应用提供参考，促进诊断试剂产业科技进步。
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第一章 绪论 1
第一节 体外诊断技术发展历程 1
一、病原学诊断 1
二、免疫学诊断 2
三、分子诊断 4
四、即时检测 9
第二节 诊断技术应用现状 10
一、动物疫病诊断技术标准化 10
二、动物疫病诊断试剂产品注册 11
第三节 诊断技术研发展望 12
一、免疫学诊断技术 13
二、分子诊断技术 13
参考文献 14
第二章 酶联免疫吸附试验 16
第一节 概述 16
一、发展历史 16
二、基本原理 17
第二节 新型酶标记 19
一、酶的发展历史 20
二、新型酶的优点 21
三、新型酶的分类 22
四、新型纳米酶活性的影响因素 24
第三节 ELISA自动化检测 25
一、ELISA自动化工作站 25
二、微流控ELISA 26
三、数字ELISA 27
第四节 ELISA诊断方法与应用 29
一、禽病诊断应用 29
二、猪病诊断应用 33
三、牛羊病诊断应用 43
四、宠物疫病诊断应用 49
五、特种经济动物病诊断应用 53
参考文献 54
第三章 免疫层析检测技术 61
第一节 概述 61
一、发展历史 61
二、免疫层析试纸结构 62
三、免疫层析试纸检测原理 63
四、免疫层析试纸检测模式 65
五、免疫层析技术发展 72
第二节 免疫层析高敏感检测 72
一、结构改良LFIA 73
二、比色LFIA 74
三、荧光LFIA 77
四、表面增强拉曼散射LFIA 79
五、化学发光LFIA 79
六、热力LFIA 79
七、磁力LFIA 80
八、电化学LFIA 80
第三节 免疫层析多重检测 80
一、多联LFIA 81
二、多通道LFIA 82
三、多重标记LFIA 82
第四节 免疫层析定量检测 83
一、定量检测阅读仪 84
二、智能手机定量检测 86
第五节 免疫层析诊断方法与应用 87
一、禽病诊断应用 87
二、猪病诊断应用 89
三、牛羊病诊断应用 93
四、宠物病诊断应用 95
参考文献 95
第四章 免疫荧光检测技术 97
第一节 概述 97
一、发展历史 97
二、基本原理 97
三、检测方法 97
四、荧光标记物 100
第二节 新型荧光标记 103
一、稀土元素标记 104
二、绿色荧光蛋白标记 106
三、荧光纳米颗粒标记 107
第三节 时间分辨荧光免疫分析 110
一、基本原理 110
二、TRFIA 技术特点 111
三、常用的TRFIA 分析系统 112
四、常用的TRFIA 技术方法类型 114
五、用于TRFIA 的材料 115
六、TRFIA 应用 115
第四节 免疫荧光诊断方法与应用 116
一、禽病诊断应用 116
二、猪病诊断应用 117
三、牛羊病诊断应用 119
四、宠物病诊断应用 120
参考文献 121
第五章 化学发光免疫分析 124
第一节 概述 124
一、发展历史 124
二、化学发光 125
三、化学发光检测方法 127
第二节 经典标记化学发光免疫分析 130
一、吖啶类标记的直接化学发光免疫分析 130
二、鲁米诺衍生物标记的直接化学发光免疫分析 132
三、辣根过氧化物酶催化的化学发光免疫分析 133
四、碱性磷酸酶催化的化学发光免疫分析 134
五、化学发光免疫分析系统联用技术 136
第三节 电化学发光免疫分析 137
一、电化学发光免疫分析的基本原理和磁性微球技术 137
二、电化学发光免疫分析的应用 141
第四节 新型化学发光免疫分析 144
一、纳米酶催化化学发光免疫分析 144
二、光激化学免疫分析系统 145
第五节 化学发光诊断方法与应用 147
一、禽病诊断应用 147
二、猪病诊断应用 148
三、牛羊病诊断应用 150
四、宠物病诊断应用 151
参考文献 152
第六章 蛋白质芯片技术 154
第一节 概述 154
一、生物芯片 154
二、蛋白质芯片 154
第二节 荧光蛋白质芯片 158
一、荧光蛋白质芯片的原理 158
二、荧光蛋白质芯片的分类 158
三、荧光蛋白质芯片的标记和检测方法 159
四、荧光蛋白质芯片的制备和检测 160
五、荧光蛋白质芯片的优点 160
六、荧光蛋白质芯片的缺点 160
第三节 化学发光蛋白质芯片 161
一、化学发光蛋白质芯片的原理 161
二、化学发光蛋白质芯片的标记方式 161
三、化学发光蛋白质芯片的制备和检测 162
四、化学发光蛋白质芯片的优点 163
五、化学发光蛋白质芯片的缺点 163
第四节 可视化蛋白质芯片 163
一、可视化蛋白质芯片的原理 163
二、可视化蛋白质芯片的技术环节 163
三、可视化蛋白质芯片的显色技术 164
第五节 液相蛋白质芯片 166
一、液相蛋白质芯片的原理 167
二、液相蛋白质芯片的优点 167
三、液相蛋白质芯片的缺点 168
四、液相蛋白质芯片的种类 168
第六节 蛋白质芯片诊断方法与应用 169
一、禽病诊断应用 170
二、猪病诊断应用 171
三、牛羊病诊断应用 172
四、其他诊断应用 173
参考文献 174
第七章 聚合酶链反应 177
第一节 概述 177
一、PCR历史 177
二、PCR技术原理 178
第二节 多重PCR芯片 186
一、多重PCR芯片技术原理 187
二、多重PCR芯片技术优势和特点 191
第三节 实时荧光定量PCR 191
一、实时荧光定量PCR技术原理 192
二、实时荧光定量PCR检测方法 194
三、实时荧光定量PCR定量方法 196
第四节 数字PCR 197
一、数字PCR基本原理及反应过程 197
二、数字PCR操作方法 199
三、数字PCR平台 200
第五节 PCR诊断方法与应用 201
一、禽病诊断应用 201
二、猪病诊断应用 204
三、牛羊马病诊断应用 206
四、宠物病诊断应用 208
五、特种经济动物病诊断应用 208
参考文献 210
第八章 等温扩增技术 214
第一节 概述 214
一、等温扩增技术的发展 214
二、等温扩增技术的分类 215
第二节 环介导等温扩增技术 219
一、LAMP技术及其原理 219
二、LAMP操作程序和技术要点 225
三、LAMP技术的发展 227
第三节 重组酶聚合酶扩增技术 230
一、RPA工作原理 230
二、RPA技术的发展 234
第四节 等温扩增诊断方法与应用 236
一、禽病诊断应用 236
二、猪病诊断应用 239
三、牛羊病诊断应用 244
四、特种经济动物病诊断应用 245
参考文献 246
第九章 基因芯片检测技术 249
第一节 概述 249
一、基因芯片类型 249
二、基因芯片原理 249
三、基因芯片检测系统 249
第二节 微阵列基因芯片 251
一、技术类型 251
二、技术特点 252
三、技术步骤 252
第三节 可视化基因芯片 254
一、技术类型 254
二、技术特点 256
三、技术步骤 256
第四节 液相基因芯片 257
一、技术类型 257
二、技术特点 258
三、技术步骤 258
第五节 基因芯片诊断方法与应用 259
一、禽病诊断应用 259
二、猪病诊断应用 261
三、牛羊病诊断应用 264
四、宠物病诊断应用 265
五、特种经济动物病诊断应用 265
六、其他诊断应用 266
参考文献 267
第十章 CRISPR核酸检测技术 270
第一节 概述 270
一、CRISPR系统 270
二、CRISPR技术的发展 272
第二节 CRISPR-Dx生物学特性 275
一、CRISPR-Dx结构生物学 275
二、CRISPR-Dx酶学性质 278
第三节 CRISPR-Dx核酸预扩增技术 281
一、基于重组酶的等温扩增（RPA 和RAA） 282
二、环介导等温扩增 283
三、转录介导的核酸扩增技术 283
四、WGA 技术 284
五、无酶扩增技术 285
第四节 CRISPR诊断方法与应用 286
一、禽病诊断应用 286
二、猪病诊断应用 288
三、牛羊病诊断应用 294
四、宠物病诊断应用 294
参考文献 295
第十一章 表面等离子体激元共振检测技术 302
第一节 概述 302
一、折射率检测意义及检测方法 302
二、表面等离子体激元共振检测方法发展历程 303
三、表面等离子体激元共振检测方法的原理 304
第二节 表面等离子体激元共振技术基本理论 305
一、介质界面两侧的光传播特性 305
二、表面等离子体激元共振光学基本理论 308
第三节 表面等离子体激元共振关键技术及与其他检测方法联用 313
一、表面等离子体激元共振探测器件耦合 314
二、表面等离子体激元共振生物芯片 318
三、表面等离子体激元共振检测系统 320
四、表面等离子体激元共振检测技术与其他检测方法联用 325
第四节 表面等离子体激元共振检测技术应用 338
一、表面等离子体激元共振生物分子相互作用检测 339
二、表面等离子体激元共振检测技术应用于动物疫病检测 340
三、表面等离子体激元共振蛋白质免标准浓度分析方法 342
四、表面等离子体激元共振技术在药物分析中的应用 344
第五节 结语和展望 346
参考文献 347
第十二章 生物传感器 352
第一节 概述 352
一、生物传感器的发展 352
二、生物传感器的构成及分类 353
三、生物敏感膜及其制备 355
第二节 酶生物传感器 358
一、电化学酶生物传感器 359
二、半导体酶生物传感器 362
三、热敏电阻酶生物传感器 363
四、光纤酶生物传感器 364
第三节 免疫传感器 365
一、免疫传感器检测方法 366
二、免疫传感器分类 367
第四节 基因传感器 370
一、基因传感器的特性及分类 371
二、电化学DNA传感器 371
三、压电晶体DNA传感器 372
四、其他类型DNA传感器 373
第五节 微生物及组织细胞生物传感器 374
一、微生物传感器 374
二、生物组织和细胞传感器 375
三、细胞器传感器 377
第六节 新型生物传感器 377
一、分子印迹生物传感器 377
二、丝网印刷生物传感器 378
三、纳米生物传感器 379
参考文献 379
第十三章 量子点检测技术 382
第一节 概述 382
第二节 量子点标记 386
一、非特异性共价偶联 387
二、特异性共价偶联 388
三、点击化学偶联 389
四、金属配位偶联 389
五、非特异性物理吸附偶联 391
六、生物分子桥接偶联 392
第三节 量子点微球技术 392
第四节 量子点及量子点微球的应用 394
一、量子点荧光显微技术 395
二、量子点荧光免疫印迹技术 395
三、量子点荧光偶联免疫分析技术 395
四、流式细胞分选技术 396
五、量子点基因芯片技术 396
六、量子点荧光定量侧流层析技术 396
七、量子点微流控检测技术 397
八、量子点液相芯片技术 397
第五节 量子点诊断方法与应用 402
一、量子点快检试剂 402
二、宠物医疗诊断 403
三、量子点免疫荧光定量快检项目 404
参考文献 406
第十四章 微流控检测技术 409
第一节 概述 409
一、微流控技术的发展 409
二、微流控技术的特点 410
三、微流控技术的优势 412
四、微流控芯片的制造 413
第二节 微流控诊断方法与应用 416
一、微流控诊断方法 416
二、微流控诊断应用 417
第三节 微流控技术的应用前景与发展领域 422
一、微流控技术在体外诊断上的应用前景 422
二、微流控技术在未来的发展领域 426
参考文献 428
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