本书是为了适应医学教育改革、满足培养高素质创新型医学人才的需要而编写的一本生物化学与分子生物学实验教材。本书继承了第1版的基本框架、结构与主要内容,在此基础上增加了一些常用技术,删减了一些很少在本科生或研究生中开展的实验。本书分为两篇:第一篇介绍了生物化学与分子生物学实验基本知识与理论,包括生物化学与分子生物学实验基本知识、生物化学实验基本技术理论、分子生物学实验基本技术理论、生物化学与分子生物学专业常用数据库及其应用;第二篇为生物化学与分子生物学实验操作,共精选了50个生物化学与分子生物学的具体实验。另外,在附录中汇集了常用生物化学与分子生物学试剂的配制方法。
样章试读
目录
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第一篇生物化学与分子生物学实验基本知识与理论
第一章生物化学与分子生物学实验基本知识1
一、实验室基本规则1
二、实验室基本操作2
三、实验样品的制备6
四、实验误差与数据处理8
五、实验记录与实验报告13
第二章生物化学实验基本技术理论15
一、分光光度技术15
二、层析技术21
三、电泳技术37
四、离心技术44
第三章分子生物学实验基本技术理论49
一、重组DNA技术49
二、核酸分子杂交技术53
三、聚合酶链反应技术59
四、蛋白质印迹技术65
第四章生物化学与分子生物学专业常用数据库及其应用68
一、常用数据库68
二、常用分析工具76
三、真核基因启动子区生物信息学分析87
四、microRNA靶标的预测92
第二篇生物化学与分子生物学实验操作
第五章生物化学实验操作97
实验1蛋白质的两性反应与等
电点测定97
实验2蛋白质的沉淀反应99
实验3蛋白质的热变性101
实验4双缩脲法测定蛋白质含量103
实验5Folin-酚试剂法测定蛋白质含量105
实验6考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量107
实验7紫外吸收法测定蛋白质含量109
实验8BCA法测定蛋白质含量111
实验9凯氏定氮法测定蛋白质含量112
实验10乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白115
实验11SDS-PAGE蛋白电泳117
实验12蛋白质双向电泳121
实验13单向上行纸层析分离氨基酸123
实验14转氨基作用与氨基酸的纸层析125
实验15凝胶柱层析分离蛋白质127
实验16动物肝脏DNA的分离提取、鉴定及含量测定131
实验17动物组织RNA的分离提取、鉴定及含量测定133
实验18温度对酶活性的影响134
实验19酸碱度对酶活性的影响136
实验20抑制剂和激活剂对酶活性的影响137
实验21尿淀粉酶活性的测定139
实验22酶反应速度与米氏常数测定141
实验23血糖(葡萄糖)的测定145
实验24血清甘油三酯的测定147
实验25血清胆固醇的测定148
实验26血清高密度脂蛋白胆固醇及其亚组分测定153
实验27血清尿素氮含量测定(改良二乙酰一肟法)155
实验28血液和尿中肌酐含量测定156
第六章分子生物学实验操作159
实验29质粒DNA的提取159
实验30质粒DNA的酶切及电泳160
实验31DNA片段的回收162
实验32DNA片段的连接164
实验33感受态细菌的制备166
实验34重组DNA的转化与筛选167
实验35外源基因在大肠杆菌中的诱导表达170
实验36常规PCR171
实验37逆转录-聚合酶链反应173
实验38实时定量PCR176
实验39DNA的分子杂交——Southern印迹178
实验40RNA的分子杂交——Northern印迹182
实验41蛋白质的免疫印迹——Western印迹185
实验42cDNA文库的构建187
实验43荧光素酶报告基因检测启动子活性192
实验44电泳迁移阻滞实验195
实验45染色质免疫沉淀实验201
实验46酵母双杂交实验205
实验47RNA干扰实验210
实验48蛋白质免疫共沉淀实验216
实验49RNA免疫共沉淀实验218
实验50GSTpull-down实验220
附录222
附录1化学试剂分级与注意事项222
附录2常用缓冲液的配制223
附录3硫酸铵饱和度计算表229
附录4常用培养基及抗生素的配制231
附录5离心机转速(r/min)与相对
离心力(RCF)的换算234