本书内容分为三大部分:第1部分系统介绍了生物化学实验基本原理及方法,包括生物分子分离纯化、分光光度技术、层析技术、电泳技术、离心技术和分子生物学技术基础;第2部分为基础性实验,主要是生物化学的经典实验,包括蛋白质、酶、维生素、核酸、糖和脂肪的分离和测定,共计30个实验项目,旨在强化生物化学基础实验技能,可操作性强;第3部分为7个综合性实验,每个实验项目涉及两个或两个以上的技术,目的在于培养学生的综合实验能力。第1部分的生物化学实验基础理论,在后两个部分中得到了切实应用和充分体现。
样章试读
目录
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前言
第1 部分 生物化学实验基本原理与方法 1
Part 1 Basic Principles and Methodologies of Biochemical Experiments 3
I 生物大分子的分离与纯化的一般步骤与方法 5
I General Procedures and Methods for Isolation and Purification of Biomacromolecules 13
II 分光光度法 25
II Spectrophotometry 28
III 层析 33
III Chromatography 38
IV 电泳 44
Ⅳ Electrophoresis 49
V 离心 55
V Centrifugation 58
VI 分子生物学技术基础——聚合酶链式反应(PCR) 61
VI Brief Introduction to Basic Technique of Molecular Biology—Polymerase Chain Reaction (PCR) 66
第2 部分 基础性实验 75
Part 2 Basic Experiments 75
实验1 蛋白质和氨基酸的呈色反应 77
Experiment 1 Color Reactions of Proteins and Amino Acids 82
实验2 蛋白质的沉淀与变性 87
Experiment 2 Precipitation and Denaturation of Proteins 92
实验3 微量凯氏定氮法测蛋白质总氮含量 97
Experiment 3 Quantification of Crude Proteins—Kjeldahl’s Nitrogen Determination 101
实验4 双缩脲法测定蛋白质含量 106
Experiment 4 Quantification of Proteins—Biuret Method 108
实验5 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量 110
Experiment 5 Quantification of Proteins — Folin-Lowry Method 113
实验6 紫外吸收法测定蛋白质含量 115
Experiment 6 Quantification of Proteins by Ultraviolet Absorption 117
实验7 染料结合法测定蛋白质含量 119
Experiment 7 Quantification of Proteins by Dye-binding Method 122
实验8 几种重要氨基酸(赖氨酸?色氨酸和脯氨酸)的含量测定 124
Experiment 8 Determination of the Contents of Some Important Amino Acids (Lys, Trp and Pro) 129
实验9 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 135
Experiment 9 Cellulose Acetate Membrane Electrophoresis of Serum Proteins 138
实验10 酪蛋白的制备 141
Experiment 10 Preparation of Casein 143
实验11 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定蛋白质分子质量 145
Experiment 11 Molecular Weight Determination of Proteins by SDS-PAGE 151 实验12 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦测定蛋白质等电点 158
Experiment 12 pI Determination of Proteins by Polyacrylamide Gel Isoelectrofocusing 161
实验13 酶的特性 165
Experiment 13 Properties of Enzymes 170
实验14 多酚氧化酶米氏常数(Km)的测定 176
Experiment 14 Determination of Michaelis Constant (Km) of Polyphenol Oxidase 179
实验15 核酸酶的活力测定 182
Experiment 15 Activity Assay of Nucleases 184
实验16 谷丙转氨酶活力测定 187
Experiment 16 Determination of Activity of Glutamate-Pyruvate Transaminase 189
实验17 植物抗氧化酶类(超氧物歧化酶?过氧化物酶和过氧化氢酶)活性测定 193
Experiment 17 Activity Assay of Common Antioxidant Enzymes (SOD, POD and CAT) In Plant 198
实验18 乳酸脱氢酶(LDH)活性测定 205
Experiment 18 Activity Assay of Lactate Dehydrogenase (LDH) 208
实验19 维生素C 的定量测定——2,6-二氯酚靛酚法 211
Experiment 19 Quantification of Vitamin C by 2, 6-Dichlorophenolindo Phenol Method 214
实验20 花菜中核酸的分离和鉴定 218
Experiment 20 Extraction and Identification of Nucleic Acids From Cauliflower 221
实验21 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 225
Experiment 21 Extraction of Yeast RNA and Identification of Its Components 227
实验22 定磷法测定核酸含量 230
Experiment 22 Quantification of Nucleic Acids by Method of Phosphate Determination 233
实验23 定糖法测定RNA 含量 236
Experiment 23 Quantification of RNA by Ribose Determination Method 238
实验24 二苯胺法测定DNA 含量 241
Experiment 24 Quantification of DNA by Diphenylamine Method 243
实验25 紫外吸收法测定核酸含量 245
Experiment 25 Quantification of Nucleic Acids by Ultraviolet Absorption Method 247
实验26 醋酸纤维薄膜电泳分离核糖核苷酸 249
Experiment 26 Separation of Ribonucleotides by Cellulose Acetate Membrane Electrophoresis 251
实验27 还原糖和总糖的含量测定——DNS 法 253
Experiment 27 Determination of Reducing Sugar and Total Sugar by DNS Method 256
实验28 血糖的定量测定——葡萄糖氧化酶-氨基安替比林(GOD-PAP)法 259
Experiment 28 Quantification of Blood Glucose by Glucose Oxidase-4-Aminoantipyrine (GOD-PAP) 261
实验29 粗脂肪的提取和测定 263
Experiment 29 Extraction and Quantitative Determination of Crude Fat 265
实验30 油脂的化学性质 267
Experiment 30 Chemical Properties of Oil or Fat 273
第3 部分 综合性实验 281
Part 3 Comprehensive Experiments 281
实验31 蛋白质的酸水解及其氨基酸的纸层析鉴定 283
Experiment 3 Acid Hydrolysis of Proteins and Isolation and Identification of Amino Acids by Paper Chromatography 285
实验32 离子交换层析分离混合氨基酸 288
Experiment 32 Separating Mixed Amino Acids by Ion-exchange Chromatography 291
实验33 血清球蛋白的盐析分离及分子筛凝胶层析法脱盐 294
Experiment 33 Salting-out Separation of Serum Globulins and Desalting by Molecular Sieving Gel Chromatography 297
实验34 糖的测定和鉴定——蒽酮试剂和纸层析法 301
Experiment 34 Quantification and Identification of Saccharides by Anthrone Colorimetry and Paper Chromatography 304
实验35 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶 307
Experiment 35 Separating LDH Isoenzymes by PAGE 312
实验36 叶绿体的制备及相关分析 318
Experiment 36 Preparation and Analyses of Chloroplasts 325
实验37 植物分子生物学系列实验 334
Experiment 37 Series Experiments of Plant Molecular Biology 352
参考文献 374
附录 375
附录1 基础生物化学实验室常用仪器简介 377
附录2 常用缓冲溶液的配制 385