本书聚焦分子生物学实验的核心理论、标准操作流程与关键技术。全书内容架构清晰,从实验室规范入手,涵盖核酸提取与鉴定、PCR扩增、限制性内切酶消化与鉴定、基因重组、感受态细胞的制备与转化等基础实验模块;并进一步延伸至实时荧光定量PCR、基因定点突变、线虫RNA干扰及酵母基因编辑等综合性拓展实验。全书详尽阐释实验原理、操作要点及结果分析方法,配套经典科学小故事与思考题,实现理论深度与实践操作的有机融合。本书内容贴合高校实验教学与科研入门需求,图文并茂,可以帮助读者快速掌握核心实验技能,提升科研素养与动手能力。
样章试读
目录
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前言
第一章 分子生物学实验室规范及注意事项 1
第二章 基因组DNA的提取技术 8
实验1 植物基因组DNA的提取 9
实验2 动物基因组DNA的提取 12
实验3 微生物基因组DNA的提取 14
实验4 土壤微生物基因组DNA的提取 17
实验5 细胞器DNA的提取(线粒体、叶绿体) 20
第三章 DNA常用的检测分析方法 25
实验1 DNA浓度与纯度的紫外分光光度法测定 26
实验2 DNA的琼脂糖凝胶电泳 28
实验3 DNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳 31
第四章 RNA的提取与鉴定 36
实验1 植物组织总RNA的提取 37
实验2 哺乳动物组织总RNA的提取 40
实验3 总RNA的变性琼脂糖凝胶电泳 43
实验4 总RNA的非变性琼脂糖凝胶电泳 46
第五章 PCR扩增技术 50
实验1 常规PCR扩增 51
实验2 逆转录PCR扩增 54
实验3 实时荧光定量PCR扩增 57
实验4 巢式PCR扩增 61
实验5 多重PCR扩增 64
实验6 微滴数字PCR扩增 66
第六章 限制性内切酶消化与鉴定 72
实验1 基因组DNA的酶切鉴定 73
实验2 质粒DNA的酶切鉴定 76
实验3 PCR产物的酶切鉴定 78
实验4 λ DNA的酶切鉴定 80
第七章 目的基因的分离与纯化 84
实验1 乙醇沉淀法纯化PCR产物 84
实验2 硅胶(柱式)吸附法纯化PCR产物 86
实验3 外源DNA的琼脂糖凝胶电泳回收 89
第八章 DNA的体外重组 94
实验1 PCR产物与T载体的连接 94
实验2 黏性末端DNA片段的连接 97
实验3 平末端DNA片段的连接 101
实验4 In-Fusion基因克隆方法 104
第九章 感受态细胞的制备及转化 110
实验1 大肠杆菌化学感受态细胞的制备 111
实验2 大肠杆菌电穿孔感受态细胞的制备及转化 114
实验3 PCR产物TA克隆及蓝白斑筛选 116
实验4 碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA 119
第十章 外源基因的原核表达 123
实验1 DNA分子的修饰及酶切技术 128
实验2 重组原核表达载体的构建与鉴定 132
实验3 绿色荧光蛋白基因在大肠杆菌中的诱导表达 136
第十一章 酵母基因编辑技术(ADE2敲除) 140
实验1 gRNA设计与载体构建 141
实验2 LiAc转化法转化酵母和ADE2敲除 144
实验3 表型验证和PCR验证 146
实验4 质粒剔除 148
第十二章 真核表达载体构建、遗传转化及亚细胞定位 151
实验1 真核表达载体构建及农杆菌转化 151
实验2 农杆菌蘸花法侵染拟南芥 154
实验3 农杆菌注射法转化烟草 157
实验4 烟草瞬时表达观察亚细胞定位 160
第十三章 线虫转基因与RNAi技术 164
实验1 绿色荧光蛋白基因在秀丽隐杆线虫中的表达 164
实验2 原核表达dsGFP宿主的制备和诱导 168
实验3 RNAi载体的饲喂及qRT-PCR检测RNAi效率 170
第十四章 基因定点突变与蛋白质互作检测 174
实验1 定点突变载体的构建 174
实验2 酵母双杂交检测蛋白质互作 178
附录 常用菌株与核酸的贮存 183
附录1 细菌、酵母及核酸贮存总览 184
附录2 常用的试剂及培养基配制方法 187