本书系统介绍了基因工程的原理、策略、技术方法和应用等方面的内容，具有较强的前瞻性和实用性。全书分为基因工程基础、基因工程操作方法和基因工程应用技术3篇，共13章，内容包括基因工程的概况、核酸操作技术、工具酶、载体与宿主系统、DNA的克隆策略、聚合酶链反应、DNA序列分析、重组子的筛选、目的基因在受体细胞中的表达、目的蛋白的纯化与分析、基因操作技术在医学与法医学上的应用、转基因生物和基因工程的安全性与发展前景。 本书可作为高等院校生物科学、生物技术、生物工程、生物制药等相关专业本科生的教学用书，也可供相关的科研、技术和管理人员参考。
样章试读
目录
- 前言
第一篇 基因工程基础
第一章 基因工程概况
第一节 基因与基因工程
一、基因的概念
二、基因工程的概念
三、基因工程的操作流程
四、人类基因组计划
第二节 基因工程的发展与意义
一、基因工程的发展
二、基因工程的研究意义
参考文献
第二章 核酸操作技术
第一节 核酸操作的基本原理
一、DNA双螺旋的变性与复性
二、基因操作的工具
第二节 DNA和RNA的分离提取
一、DNA的提取
二、RNA的提取
第三节 核酸标记
一、末端标记
二、缺口平移
三、引物原位标记法
第四节 核酸的处理、定量与保存
一、核酸的分离纯化
二、凝胶电泳法分离核酸
三、核酸的定量和保存
参考文献
第三章 工具酶
第一节 限制性内切核酸酶
一、限制性内切核酸酶的发现
二、限制性内切核酸酶的命名方法
三、限制性内切核酸酶的识别特点
四、限制性内切核酸酶的切割方式
五、内切酶星号活性
六、内切酶反应的影响因素
第二节 其他常用工具酶
一、DNA连接酶
二、DNA聚合酶
三、修饰性工具酶
参考文献
第二篇 基因工程操作方法
第四章 载体与宿主系统
第一节 载体的种类
一、质粒载体
二、噬菌体载体
三、动物细胞载体
第二节 宿主系统
一、原核宿主
二、真核宿主
参考文献
第五章 DNA的克隆策略
第一节 化学法合成DNA
一、短片段直接连接法组装DNA
二、长片段部分重叠法组装DNA
第二节 构建文库法克隆基因
一、构建基因组文库克隆目的基因
二、构建cDNA文库克隆目的基因
第三节 依据特定的DNA序列或表达产物特性克隆基因
一、用核酸探针筛选目的DNA
二、用寡核苷酸探针筛选目的DNA
三、表达序列标签(EST)法筛选目的DNA
四、转座子标签法克隆DNA
五、依据表达产物特性筛选目的DNA
第四节 基于mRNA反转录的差异的基因分离
一、RACE方法分离基因
二、差异杂交筛选目的DNA
三、mRNA差异显示技术
四、代表性差别分析法分离目的基因
五、抑制差减杂交法分离目的基因
第五节 DNA微阵列法分离基因
一、DNA微阵列的分类
二、DNA微阵列法分离基因的原理
参考文献
第六章 聚合酶链反应(PCR)
第一节 概述
一、PCR反应中的主要成分
二、PCR反应过程
三、PCR产物的克隆
第二节 影响PCR的主要因素
一、循环温度设计
二、引物设计
三、DNA聚合酶
四、扩增平台期
第三节 PCR反应的应用模式
一、兼并引物PCR
二、套式引物PCR
三、复合PCR
四、反向PCR
五、不对称PCR
六、加端PCR
七、锚定PCR
八、玻片PCR
九、标记PCR和彩色PCR
十、反转录PCR
十一、定量PCR
参考文献
第七章 DNA序列分析
第一节 传统的DNA测序方法
一、Sanger双脱氧链终止法
二、Maxam-Gilbert化学降解法
第二节 DNA的自动化测序
一、DNA自动化测序的基本原理
二、DNA自动测序的步骤
三、DNA自动分析仪
第三节 DNA测序策略
一、定向测序策略
二、随机测序策略
三、多路测序策略
四、引物步移测序策略
第四节 新一代测序仪
一、SOLiD测序仪
二、454测序仪
三、Solexa高通量测序仪
四、HeliScope测序仪
五、新型纳米孔测序技术
六、新一代测序技术的前景
第五节 其他DNA测序技术
一、质谱法
二、杂交测序法
三、原子探针显微镜测序法
四、流式细胞仪测序法
五、超薄水平凝胶电泳测序法
参考文献
第八章 重组子的筛选
第一节 载体表型选择法
一、抗药性标记及其插入失活选择法
二、β-半乳糖苷酶显色反应选择法
三、噬菌斑筛选法
第二节 根据插入基因的表型选择
第三节 DNA电泳检测法
一、快速裂解菌落鉴定法
二、酶切电泳筛选法
三、PCR扩增检测法
第四节 核酸杂交检测法
一、核酸探针
二、核酸杂交检测方法
三、DNA-蛋白质筛选法
第五节 免疫化学检测法
一、放射性抗体测定法
二、免疫沉淀测定法
三、酶联免疫吸附测定法
四、免疫印迹
第六节 转译筛选法
一、无细胞翻译系统
二、转译筛选
第七节 几种常用的真核生物重组基因选择方法
一、利用遗传选择标记筛选哺乳动物转基因细胞
二、利用报告基因筛选植物转化细胞
参考文献
第九章 目的基因在受体细胞中的表达
第一节 目的基因表达的条件
一、启动子与转录起始
二、mRNA的有效延伸和转录终止
三、mRNA的稳定性
四、有效的翻译起始
五、遗传密码应用的偏倚性
六、mRNA的二级结构
七、RNA的加工
八、mRNA序列上终止密码子的选择
九、表达质粒的拷贝数及稳定性
十、外源蛋白的稳定性
十一、减少基因沉默
第二节 目的基因在大肠杆菌细胞中的表达
一、大肠杆菌表达系统的优缺点
二、大肠杆菌表达载体的构成
三、目的基因在大肠杆菌中的表达形式
四、影响目的基因表达的因素
五、pET系统
第三节 目的基因在酵母中的表达
一、酵母系统的生物学特性
二、酵母表达系统的组成
三、酵母表达载体的类型和宿主菌
第四节 目的基因在昆虫细胞中的表达
一、昆虫表达系统的优势
二、昆虫表达系统的构成
三、重组病毒载体的筛选和改进
四、外源基因在BEVS中的表达水平及影响因素
五、杆状病毒表达系统的缺点
六、家蚕生物反应器
第五节 目的基因在哺乳动物细胞中的表达
一、哺乳动物细胞的表达载体
二、哺乳动物宿主细胞
三、提高哺乳动物细胞表达的策略
参考文献
第三篇 基因工程应用技术
第十章 目的蛋白的纯化与分析
第一节 目的蛋白的分离纯化
一、离心法
二、沉淀法
三、膜分离
四、电泳法
五、色谱法
第二节 目的蛋白的分析
一、紫外-可见分光光度法
二、HPLC法和CE法
三、质谱法
参考文献
第十一章 基因操作技术在医学与法医学上的应用
第一节 基因治疗
一、基因治疗的概念和策略
二、基因治疗的基本过程
三、基因治疗的临床应用研究
第二节 基因诊断
一、基因诊断的概念及特点
二、基因诊断的主要技术方法
三、基因诊断的应用
第三节 基因工程制药
一、基因工程药物的分类
二、基因工程药物的发展
三、基因工程药物产业化状况
参考文献
第十二章 转基因生物
第一节 转基因动物
一、转基因动物技术的基本原理
二、常用转基因动物的方法
三、转基因动物的检测
四、转基因动物的应用
五、转基因动物研究中存在的问题与展望
第二节 转基因植物
一、转基因植物技术的基本原理
二、植物转基因的常用方法
三、转基因植物的筛选与检测
四、转基因植物的应用
第三节 转基因生物食品
一、转基因食品分类
二、转基因食品的发展状况
参考文献
第十三章 基因工程的安全性与发展前景
第一节 基因工程的安全性
一、转基因生物的安全性
二、与基因工程产品安全性有关的重要事件
三、生物安全政策、法规与风险评估
四、转基因生物与国际贸易和社会经济问题
五、转基因生物的社会伦理问题
第二节 基因工程的发展前景
一、基因工程在农业中应用的发展前景
二、基因工程在生物医药中应用的发展前景
三、基因工程在工业中应用的发展前景
四、基因工程在其他领域中应用的发展前景
参考文献
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