本书由美国冷泉港实验室邀请125位专家共同研讨和撰稿，是一部最新、最权威的综合性的细胞实验技术操作指南。汇总了被细胞生物学家们证明行之有效的众多的技术和方法，它们由三大主体组成：细胞的培养及其生物化学分析、光学显微镜及细胞结构和基因及其产物的亚细胞定位。本书内容丰富，包括从无脊椎动物到脊椎动物细胞的基本培养方法，细胞器的分离及生化分析，光学显微镜及电子显微镜水平的蛋白质定位，最近发展的共聚焦、去卷曲、多光子显微镜技术，活细胞的蛋白质动力学研究以及一系列进行蛋白质和大分子复合物显微镜研究的最先进技术方法，单拷贝基因及其转录产物的定位和原位杂交等，实为每个进行细胞和组织生物学研究的实验室乃至任何生命科学实验室所不可少的。
本书与备受称赞的冷泉港实验室出版社的《分子克隆实验指南》和《抗体技术实验指南》具有同样的特点，对即使具有多年工作经验的研究者也极其有用。本书可供在不同领域从事生命科学研究的人员参考。
样章试读
目录
- 序言
前言
致谢
缩写
上册
第一卷：细胞的培养及生物化学分析
第1章 细胞的培养及分析
第1节 哺乳动物细胞培养
第2节 培养中细胞的生长及调控
第3节 作为细胞和组织培养中底物的细胞外基质成分
第4节 成纤维细胞的分离和培养
第5节 上皮细胞的培养
第6节 人毛细血管内皮细胞的分离
第7节 淋巴细胞的分离与转化
第8节 鼠胚干细胞的培养和体外分化
第9节 原代神经细胞的分离和培养
第10节 鸡胚胎成肌细胞的分离和培养
第11节 新生大鼠心脏细胞的分离和培养
第12节 成年大鼠心室肌肉细胞的分离和培养
第13节 体细胞融合
第14节 细胞同步化
第15节 凋亡分析
第16节 流式细胞计量术
第17节 纤毛类原生动物腹纤毛类的培养和使用
第18节 四膜虫的培养和操作
第19节 衣藻的培养和遗传分析
第20节 盘基网柄菌的培养和分析
第21节 酿酒酵母的培养和转化
第22节 非洲粟酒裂殖酵母的培养和转化
第23节 海洋无脊椎动物胚胎的培养
第2章 代谢标记和蛋白质修饰
第24节 用32P-磷酸稳态标记HeLa细胞
第25节 mRNA体外细胞核连缀转录分析
第26节 蛋白质的代谢放射标记
第27节 32P代谢标记细胞研究蛋白质的磷酸化
第28节 利用透化细胞与细胞器研究蛋白质的磷酸化
第29节 用外源底物进行蛋白质激酶分析
第30节 激酶的动力学：应用于双相底物酶的简单酶动力学
第31节 磷酸酶的简单制备
第32节 蛋白质的甲基化和异戊烯化作用
第33节 蛋白质的糖基化
第3章 亚细胞的分离
第34节 亚细胞的分离
第35节 用阳离子硅胶分离技术分离细胞膜
第36节 桥粒的分离
第37节 粗微体的亚细胞分离
第38节 核糖体、核糖体亚基和多核糖体的纯化
第39节 高尔基体的分离和分析
第40节 从哺乳动物组织中分离过氧化物酶体(微体)
第41节 从细胞、组织中分离线粒体
第42节 完整叶绿体的分离
第43节 从组织或悬浮培养物中制备细胞核
第44节 细胞核基质：用于显微和生化分析的制备
第45节 用于细胞核蛋白输入的细胞渗透方法
第46节 利用瞬时种间异核体分析核质穿梭
第47节 核纤层以及富含核纤层组分的制备和鉴定
第48节 分离核仁
第49节 用于生化和形态分析的染色体制备
第50节 DNA的纯化和Southern印迹分析
第51节 细胞和组织总RNA的纯化和Northern印迹分析
第52节 非洲爪蟾生发泡内含物的涂布制备
第53节 从肌肉和非肌肉细胞中纯化肌球蛋白和肌动蛋白
第54节 微管、微管相关蛋白和微管依赖的运动蛋白的分离
第55节 中间丝的分离和纯化
第4章 蛋白质鉴定与分析
第56节 蛋白质浓度的测定
第57节 蛋白质单-双向凝胶电泳
第58节 蛋白质双向凝胶电泳
第59节 蛋白质染色检测
第60节 蛋白质的放射自显影、荧光显影和磷光成像检测
第61节 一维和二维肽图
第62节 肽的RP-HPLC图谱和纯化
第63节 蛋白质和肽的序列分析
第5章 蛋白质表达和相互间作用
第64节 T7表达系统的蛋白产生
第65节 用GST基因融合载体表达和纯化蛋白质
第66节 杆状病毒表达：利用杆状病毒穿梭载体在大肠杆菌中产生重组杆状病毒DNA
第67节 哺乳动物表达载体
第68节 哺乳动物细胞中进行基因的诱导表达
第69节 双杂交系统/相互作用陷阱
第6章 在细胞生物学中作为工具的抗体
第70节 抗体纯化和标记概述
第71节 表位标记
第72节 免疫沉淀?
第73节 免疫印迹法和免疫印迹亲和纯化
第74节 人类自身抗体及其靶抗原的特性
下册
第二卷：光学显微镜及细胞结构
第7章 活细胞和细胞周期的观察
第75节 用光学显微镜观察活细胞
第76节 用荧光技术监测体内分子动力学
第77节 噬动轨迹法分析组织培养中细胞的运动
第78节 绿色荧光蛋白的异源表达
第79节 荧光漂白技术
第80节 活细胞中胞内自由钙的成像和检测
第81节 光学镊子的构造
第8章 大分子的制备和导入细
第82节 抗体和DNA探针的荧光标记
第83节 活体细胞的定量微注射
第84节 爪蟾卵细胞和胚胎的注射
第85节 啮齿类动物肌肉直接注射DNA
第86节 哺乳动物细胞转染DNA
第87节 利用阳离子型脂质体将DNA导入哺乳动物细胞
第88节 电穿孔和电融合
第89节 反义寡核苷酸的传递
第90节 腺病毒表达载体的用途和使用方法
第91节 复制缺陷型疱疹病毒扩增子载体及其在基因转移中的应用
第92节 反转录病毒介导的基因转导
第93节 使用反转录病毒载体进行谱系分析
第9章 光学显微镜和表面荧光显微镜
第94节 光学显微镜
第95节 视频显微镜和图像增强
第10章 共焦显微技术、多光子显微技术及去旋方法
第96节 共焦显微技术及去旋技术
第97节 多光子激发荧光显微技术
第三卷：基因及其产物的亚细胞定位
第11章 细胞器、蛋白质和基因表达的显像
第98节 进行荧光显微镜观察的细胞和组织标本的制备
第99节 组织中的β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶活性检测
第100节 用酶检测法进行蛋白质的免疫定位
第101节 细胞结构的非免疫荧光标记
第102节 免疫荧光显微术简介
第103节 微管、微管相关蛋白和中间纤维的免疫染色
第104节 肌动蛋白的免疫荧光定位
第105节 核蛋白的免疫荧光定位
第106节 酿酒酵母的免疫荧光方法
第107节 果蝇组织的免疫荧光方法
第108节 线虫的免疫荧光方法
第109节 DNA复制的分析：非同位素标记方法
第110节 RNA合成的分析：非同位素标记方法
第12章 原位杂交
第111节 DNA荧光原位杂交
第112节 染色体比较杂交
第113节 光谱核型分析法分析染色体
第114节 用3H标记探针对组织碎片标本DNA和核RNA进行原位杂交
第115节 果蝇染色体DNA的整体荧光原位杂交
第116节 RNA原位杂交
第117节 脊椎动物胚胎和分离器官的RNA整体原位检测
第118节 爪蛙胚胎RNA的整体原位检测
第119节 原位PCR
第13章 电子显微术
第120节 利用透射电子显微术成像
第121节 透射电子显微镜的样品制备方法
第122节 用扫描电子显微术成像
第123节 扫描电子显微镱的样品制备方法
第124节 扫描式透射电子显微术
第125节 DNA及DNA结合蛋白的电子显微术
第126节 核酸和核蛋白复合物的快速印迹法
第127节 电镜的细胞化学染色及酶检测
第128节 免疫电镜技术
第129节 细胞和分子的快速冷冻
第130节 冷冻置换
第131节 超薄低温切片的免疫细胞化学
第132节 冷冻断裂和冷冻断裂细胞化学
附录1 细胞生物学常用储存液、缓冲液及培养基
附录2 细胞生物学基本数据与资料
附录3 显微镜技术：镜头、滤光片及发射/激发谱
附录4 亚细胞组分的定位标志
附录5 化学试剂安全注意事项
附录6 供应厂商
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