本书主要介绍在当前生命科学研究、应用和生产领域内对天然及基因重组生物分子的分离、纯化、制备、分析、鉴定、数据处理等多方面生化分析的技术原理、实验方法、实验操作、实验设计,以及相关生化仪器的使用,涵盖了当前在蛋白质化学、蛋白质组学及生物工程下游技术中所应用的大多数层析、电泳等实验方法.本书步骤描述具体细致、实验过程系统完整,实验装置可精可简,全书图文并举、数据优化详尽,具有较强的指导性和可操作性.本书的内容分为基础实验部分和综合实验部分,实验内容可以根据相关本科生及研究生的不同层次和基础,以及不同实验室条件和应用需求进行选择性教学,其实验教学的主要方式是在着重学生基本实验操作技能训练的基础上开展综合性大实验训练.
样章试读
目录
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前言
基础实验部分
实验1紫外分光光度法(测定蛋白质吸收光谱曲线及含量) 2
实验2荧光光度测定法(测定核黄素含量)5
实验3离子交换柱层析(分离氨基酸)8
实验4凝胶层析(分离蛋白质及相对分子质量测定)13
实验5DEAEG纤维素梯度洗脱柱层析18
实验6疏水层析23
实验7亲和层析分离纯化胰蛋白酶(环氧氯丙烷活化法)27
实验8亲和层析分离纯化胰蛋白酶抑制剂(溴化氰活化法)32
实验9金属螯合柱层析38
实验10反相层析42
实验11聚焦层析46
实验12吸附层析(羟基磷灰石柱层析分离纯化DNA)53
实验13单向火箭免疫电泳58
实验14聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳和圆盘电泳61
实验15SDSG聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳(不连续体系)69
实验16SDSG聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳(连续体系)75
实验17TricineGSDSG聚丙烯酰胺凝胶电泳(分离小分子多肽)79
实验18管式凝胶等电聚焦85
实验19水平平板凝胶等电聚焦91
实验20U形管密度梯度等电聚焦98
实验21潜水式琼脂糖凝胶电泳101
实验22梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳106
实验23印迹转移电泳113
实验24酶联免疫吸附测定120
综合实验部分
实验25蔗糖酶的综合分离纯化及其性质鉴定128
实验26人绒毛膜促性腺激素的综合分离纯化及其性质鉴定139
实验27α-淀粉酶的综合分离纯化及其性质鉴定143
实验28亲和层析分离纯化尿激酶及其性质鉴定(溴化氰活化法)149
实验29双向电泳(双向电泳比较FADD和FADD-/-细胞株的蛋白质表达差异)156
实验30脉冲场凝胶电泳171
实验31毛细管电泳183
实验32基因融合蛋白质的纯化191
附录
附录A聚丙烯酰胺凝胶电泳的蛋白质银染色法200
附录B常用缓冲液的配制方法202
附录C常用数据210
参考文献232